研究背景：

目前認為大多數(shù)真菌感染發(fā)生在家庭外部。

研究目的:

在英國國內，鑒定從人工合成材料和羽毛填充的枕頭里抽吸出的灰塵里的真菌菌群。

研究方法:

用10個常規(guī)使用了1.5-20年之間的枕頭作真菌培養(yǎng)和定量培養(yǎng)。從枕頭的9個部分取樣，通過抽真空收集五個枕頭的灰塵。枕頭吸塵是在枕頭培養(yǎng)之前進行的。都是在室溫30~37攝氏度下培養(yǎng)基培養(yǎng)7天內，還有一個子樣品在培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，然后再進行平板培養(yǎng)，用標準形態(tài)學方法鑒定真菌。

研究結果：

分離出的最常見的三種菌是煙曲霉(n=10)、出芽短梗霉菌(n=6)和膠紅酵母菌(n=6)。另有47個物種從枕頭和真空吸塵器中分離出來。每個枕頭上的物種數(shù)量從4到16個不等，合成材料枕頭中的物種數(shù)量較多。相對非致敏性的出芽短梗霉菌數(shù)量，在合成材料枕頭中發(fā)現(xiàn)的煙曲霉比羽絨枕多。

結論:

我們對真菌進行了檢測，表明常規(guī)使用的傳統(tǒng)枕頭含有大量的真菌，尤其是煙曲霉?？紤]到睡眠時間，以及枕頭與氣道的距離，人造材料和羽毛枕頭可能是真菌和真菌產(chǎn)物的主要來源。這對患有呼吸道疾病的病人，尤其是哮喘和鼻竇炎患者有重要的影響。

在過去的三年中，英國哮喘的發(fā)病率呈逐步上升趨勢。已經(jīng)頒布了大量的理論，包括衛(wèi)生假說、室內塵螨的進一步暴露等，但都沒有詳細的研究證實。真菌接觸的相關性研究較少。人們通常認為，這種真菌暴露接觸通常發(fā)生在室外，除了在發(fā)霉的建筑物中。

在過去的30年里，一個巨大的生活方式的改變已經(jīng)改變了從羽毛/棉枕頭和床單/毛毯到主要的聚酯枕頭和被子。不需要羽毛保護，枕頭上的覆蓋物更多孔，孔徑從2微米增加到10微米。人工合成枕頭對哮喘的患病率和嚴重程度都有風險。布特蘭德等人估計合成材料床墊的增加可以解釋哮鳴音患病率為何有50%的增加（1）。

我們考慮了這個假設，真菌生長在寢具可能是環(huán)境的一個健康風險。成年人在約每天8小時睡眠，在大約30°C和高濕度的情況下每年可能產(chǎn)生100升汗水在床上 –這是個理想的真菌培養(yǎng)基。1936有真菌污染木棉枕頭的記錄，并伴有哮鳴發(fā)生（2）。

方法

在家庭中已經(jīng)使用多年的合成纖維枕頭和羽毛枕頭，在培養(yǎng)前收集并儲存在無菌袋中。所有的枕頭被切割成九個相等的部分，然后小樣本（樣本）從每一段枕頭取約2 x 2 x 2 cm合成枕頭和0.25克的羽絨枕頭。對于五個枕頭，額外的灰塵樣本的是在培養(yǎng)處理前用真空吸塵器通過密閉抽真空2分鐘從枕頭中取得。

枕頭樣本和灰塵樣品轉移到20和10毫升的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中含有抗生素（環(huán)丙沙星2毫克/升，慶大霉素16毫克/升和萬古霉素8毫克/升），分別渦旋震蕩為20秒，然后靜置24小時或7天。枕頭樣品也進行渦旋震蕩和用細胞計數(shù)進行真菌負荷的估計?；覊m培養(yǎng)液進行了渦旋，離心（3000轉/ 10分鐘），上清液進行細胞計數(shù)。基于這些計數(shù)，兩者用磷酸鹽緩沖液10倍稀釋，接種到等體積薩布羅葡萄糖瓊脂，然后板在室溫下培養(yǎng)，30°C至37°C長達1周。采用標準實驗室方法進行菌落計數(shù)和分離鑒定。任何不能在我們的實驗室確定的樣品被送到Centraalbureau voor Schimmelcultures（CBS），荷蘭。分離的菌株用每克枕頭菌落數(shù)（CFU）定量。

結果

枕頭的年齡介于18個月到20年。大量的真菌從所有的枕頭中培養(yǎng)出來。最常見的三種枕頭樣本是煙曲霉（n = 10），出芽短梗霉菌（n = 6）和膠紅酵母菌（N = 6）（表1）。其他從枕頭中培養(yǎng)的物種包括黃曲霉（n = 5），黑曲霉（N = 1），聚多曲霉（N = 1），灰綠曲霉（n = 1）和一個不明的曲霉菌屬的菌種，青霉菌.（N = 6），草本支袍霉（N = 6，僅在室溫），枝狀枝孢菌（N = 2）和 極細枝孢霉（n = 1），黑附球菌（N = 1），灰葡萄孢菌（n = 1），紙皮思霉（n = 1），疑似栓菌屬（絲狀真菌；n = 1），三種不同的傘菌目（典型的烤蘑菇）、細絨韌革菌（結垢或絲狀分布在樹樁上的真菌；n = 1），暗孢節(jié)菱孢（n = 1），鱗傘屬.（鮮艷的不適于食用的蘑菇；n = 1）和2株酵母菌包括近平滑念珠菌（n = 1）和高里念珠菌（N = 1）。抽真空得到的灰塵通常長短梗霉菌，紙皮思霉（n = 2），A. vitus（N = 2），短尾帚屬（N = 1），膠紅酵母（n = 1）和暗孢節(jié)菱孢（N = 1）。有些菌株（都是絲狀真菌，N = 16）不能被我們或CBS識別。

實際產(chǎn)量和定量培養(yǎng)結果在孵育溫度和時間（24小時或7天）變化很大。在7天的時間里，物種的產(chǎn)量總是更高，而在24小時到7天之間煙曲霉 CFU登了大約5個記錄。孵化后7天有厚厚的一層在培養(yǎng)液的表面暗淡的菌絲和孢子，所以在煙曲霉菌落數(shù)的增加可能是不真實的。在37°C孵化抑制短梗霉菌的生長，并略微降低了膠紅酵母的成長。

枕頭直接培養(yǎng)的物種與枕前培養(yǎng)的灰塵里的物種關系不大。特別是煙曲霉從未從灰塵樣品里培養(yǎng)出，雖然它是在枕頭上發(fā)現(xiàn)的最常見的真菌。黃曲霉同樣是如此，但A.維特不是，這是從兩個枕頭抽真空吸取的灰塵中分離的。相反，短梗霉菌CFU更是灰塵樣品里比枕頭樣品里高（表1）。

合成材料枕頭與羽毛枕頭的比較顯示，合成材料枕頭培育的物種數(shù)量較多（表2），盡管個別枕頭之間存在巨大差異。此外，在合成枕頭優(yōu)勢種為煙曲霉，而在羽毛枕頭里優(yōu)勢種是出芽短梗霉。

討論

我們給出了填充合成材料和羽毛實質的枕頭的真菌霉菌的不同之處。

三個最豐富的真菌里，煙曲霉是一種公認的過敏性真菌。事實上比其他真菌更多的過敏原已在煙曲霉鑒定。除了已批準的18種變應原（3）外，還發(fā)現(xiàn)了另外60種免疫球蛋白E（IgE）結合蛋白（4）。相反，短梗霉菌環(huán)境中沒有任何過敏原的描述也很常見，雖然已發(fā)現(xiàn)它在空調系統(tǒng)中與外源性過敏性肺泡炎的爆發(fā)有關，（5）。膠紅酵母被發(fā)現(xiàn)在皮膚點刺試驗是過敏原（6），和一個單一的烯醇化酶抗原鑒定（7）。其他一些真菌中發(fā)現(xiàn)枕頭過敏包括C.霉、黃曲霉、黑曲霉、青霉菌，值得注意的是，我們未從任何枕頭分離出室外空氣中密切相關的所謂“雷雨哮喘常見致敏真菌” 的枕鏈格孢屬（8）。

合成材料枕頭是由聚酯的惰性中空纖維制成，有多種涂層，如油酸，便于紡紗。可以預料，羽毛枕頭緊密編織覆蓋可能會阻止大孢子進出枕頭，但我們從羽毛枕頭里培養(yǎng)大了15-30微米的孢子。粗糙的編織覆蓋的合成枕頭上，大型真菌孢子無論是侵入和退出（分子孢子菌屬等）都會更多，與布特蘭德等人一致的⑴數(shù)據(jù)， 2-3微米的煙曲霉菌孢子可能通過更精細的編織覆蓋。

人類呼吸道接觸可能是孢子本身、菌絲、揮發(fā)性真菌次生代謝物或真菌降解產(chǎn)物。只有少數(shù)識別的抗原存在于孢子表面（9），大多數(shù)孢子在萌發(fā)后很早就出現(xiàn)了孢子萌發(fā)和萌發(fā)（10）。因此，如果呼吸道正常，孢子萌發(fā)不發(fā)生，那么直接暴露于孢子的粘膜就不會引起典型的過敏反應。鼻竇或呼吸道阻塞，呼吸道感染，黏液過多，局部上皮受損，可提供一種發(fā)芽介質，允許抗原暴露。這也許可以解釋為什么成年人對真菌比對孩子更敏感。成人哮喘的嚴重性是在長期的哮喘患者真菌致敏相關（11,12），不同程度的支氣管擴張癥是常見的。在這些患者中，真菌的萌發(fā)可能是氣道的一種半永久性的夾具，所以提供持續(xù)的抗原暴露。由于床上用品的真菌污染而在睡眠期間暴露可能引發(fā)并推動這一過程。大多數(shù)哮喘開始于兒童期。在有過敏家族史的3歲兒童中，有相當一部分肺功能異常的證據(jù)（13）。這意味著，在早期的生活中，肺損傷可能導致哮喘的晚期發(fā)展，即存在永久性氣道重塑。枕頭/寢具中的真菌產(chǎn)品可能在其發(fā)展的敏感時期損害氣道。例如，β-（1,3）-葡聚糖，許多真菌細胞壁的重要組成部分，是促炎癥反應的（14）。

進一步的工作是對真菌的床上用品生態(tài)要求，其中包括重要的羽絨被和枕頭的相對貢獻的環(huán)境因素。個別真菌暴露的措施需要改進。真菌貯藏量與傳播水平之間沒有太大的相關性（15），可能是直接暴露于床上用品更重要。一個緊密的編織或如Goretex?其他防護罩的使用（W. L. Gore，Livingston，英國）蓋可以防護，需求調查證實。很明顯，大量不明身份的真菌接觸源實際上一直在暗中對我們的健康造成威脅。

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參考文獻：

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